腫瘤是人類醫(yī)學(xué)發(fā)展史上的巨大挑戰(zhàn)，隨著納米技術(shù)的發(fā)展，納米醫(yī)藥技術(shù)被認(rèn)為在實(shí)現(xiàn)腫瘤的 高效和個(gè)性化治療上具有極大的優(yōu)勢。但迄 今為止，納米藥物的臨床轉(zhuǎn)化仍然面臨許多挑戰(zhàn)， 包括納米顆粒的生物相容性，臨床結(jié)果與動(dòng)物模型 實(shí)驗(yàn)的巨大差異和腫瘤的多藥耐藥性等。即使已 經(jīng)進(jìn)入臨床階段的納米藥物也被發(fā)現(xiàn)更多的是降 低藥物不良反應(yīng)而非增強(qiáng)治療效果。由于人體 生理環(huán)境復(fù)雜，納米藥物的靶向遞送低于預(yù)期設(shè) 計(jì)。研究人員指出通過被動(dòng)靶向遞送藥物時(shí)， 納米顆粒從血管滲漏的速度很慢，藥物在積累達(dá)到 治療水平所需濃度前排泄或代謝。因此，有必 要對納米藥物的體內(nèi)行為進(jìn)行監(jiān)控，以便掌握藥物 分布和療效的實(shí)時(shí)信息，從而以受控和合理的方式 調(diào)整治療策略，改善治療效果。

大豆磷脂( Lipoid S 100，德國 Lipoid 公司) ; 膽 固醇( 日本東京化成工業(yè)株式會(huì)社) ; 十 八 胺 ( 90% ，麥克林化學(xué)試劑有限公司) ; 鹽酸阿霉素 ( 99. 92% ，上海畢得醫(yī)藥科技有限公司) ; 香豆素6、DAPI、4% 多聚甲醛固定液( 源葉生物科技有限 公司) ; 其他試劑均國產(chǎn)分析純。MDA-MB-231( 人 乳腺腫瘤細(xì)胞) 由江蘇省腫瘤發(fā)生與干預(yù)實(shí)驗(yàn)室 提供。

SHZ-B( III) 循環(huán)多用真空泵( 南京科博爾儀器設(shè)備有限公司) ; 醫(yī)用離心機(jī)( 湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀 器開發(fā)有限公司) ; UV-3600 紫外分光光度計(jì)( 日 本島津公司) ; ZS90 納米粒徑電位分析儀( 英國 Malvern 公司) ; THZ-320 臺式恒溫振蕩器( 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司) ; SCIENTZ-II D 超聲波細(xì)胞 粉碎機(jī)( 寧波新芝生物科技股份有限公司) ; 低溫 時(shí)間分辨熒光光譜儀( 英國愛丁 堡 儀 器 公 司) ; NIＲ-II 活體 成 像 系 統(tǒng) ( 武漢光映美科技有限公司) ; 酶標(biāo)儀( 美國伯騰儀器有限公司) ; 場發(fā)射掃描 電子顯微鏡( 德國 Zeiss 公司) ; 透射電子顯微鏡( 日 本電子株式會(huì)社) 。

根據(jù)文獻(xiàn)合成 IＲ1061 后，用薄膜水化-超 聲法制備 NIＲ-II 成像陽離子脂質(zhì)體。精確稱取卵 磷脂、吐溫-80、十八胺、膽固醇和 IＲ1061 ( 質(zhì)量比 120∶ 24∶ 12∶ 12∶ 1) ，用二氯甲烷/乙醇( 體積比 8∶ 1) 溶于圓 底 燒 瓶 內(nèi)，37 ℃ 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜后，加 入 0. 9% NaCl 溶液 10 mL，37 ℃下振蕩水化 3 h，水浴 超聲 3 min，過 450 和 220 nm 濾 膜 各 兩 次，得 IＲ1061 陽離子脂質(zhì)體。制備載阿霉素 NIＲ-II 成像 陽離子脂質(zhì)體，精確稱取卵磷脂、吐溫-80、十八胺、 膽固醇和 IＲ1061( 質(zhì)量比 120∶ 24∶ 12∶ 12∶ 1) 按原方 案成膜后，根據(jù)硫酸銨梯度載藥法加入 3% 硫酸銨 溶液水化，將所得脂質(zhì)體于 0. 9% NaCl 溶液中透 析 48 h 后，按配方加入阿霉素( PC-DOX，8∶ 1) ，在 50 ℃ 下攪拌 30 min。將制得阿霉素脂質(zhì)體置于 0. 9% NaCl 中透析 48 h，去除游離阿霉素。制備非 十八胺改性的 DOX-IＲ1061 脂質(zhì)體( DOX-IＲ1061- Liposome) 作為對照組，其配方為卵磷脂、吐溫-80、 膽固醇和 IＲ1061( 質(zhì)量比 120∶ 24∶ 12∶ 1) ，制備方法 同 DOX-IＲ1061 陽離子脂質(zhì)體。選擇香豆素-6，一 種激光轉(zhuǎn)化效率高，性能較穩(wěn)定的脂溶性染料作為 熒光探針用于監(jiān)測陽離子脂質(zhì)體及普通脂質(zhì)體的 細(xì)胞攝取行為。為了實(shí)現(xiàn)對脂質(zhì)體的細(xì)胞攝取行 為的觀測，用等物質(zhì)的量香豆素-6 代替 IＲ1061 制備 DOX-Coumarin-6 陽離子脂質(zhì)體及 DOX-Coumarin-6 脂質(zhì)體。同時(shí)，DOX 的熒光性質(zhì)使其可作為熒光藥 物模型用于藥物攝取分析。MDA-MB-231 在含蓋玻片的培養(yǎng)皿中培養(yǎng) 24 h。觀察細(xì)胞貼壁并生長至適宜密度后用 DOXCoumarin-6 陽離子脂質(zhì)體和 DOX-Coumarin-6 脂質(zhì) 體，分別處理細(xì)胞 1 和 2 h，并用 PBS 洗滌 3 次。然 后用 4% 多聚甲醛固定細(xì)胞 15 min，再次使用 PBS 洗滌 3 次。加入 5 μg /mL DAPI 染液染色，避光放 置 5 min 后去除染色劑，加入抗熒光淬滅劑封片。 使用激光共聚焦顯微鏡觀察玻片樣品( 405 nm: DAPI，488 nm: 香豆素-6，555 nm: DOX) 。通過薄膜水化-超聲法制備脂質(zhì)體，測得 DOXIＲ1061 陽離子脂質(zhì)體流體動(dòng)力學(xué)尺寸為( 149. 9 ± 5. 3) nm，多分散系數(shù)為 0. 175，Zeta 電位為 + ( 25. 6 ± 0. 32) mV，DOX 包封率( 95. 8 ± 2. 4) % 。在 TEM 下觀察如圖 1-a 所示，脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)清晰完整，并由 于硫酸銨與阿霉素形成結(jié)晶，觀察到脂質(zhì)體內(nèi)部 明顯的內(nèi)核結(jié)構(gòu)。以上數(shù)據(jù)顯示 DOX-IＲ1061 陽 離子脂質(zhì)體具有相對均勻的分布，并成功載入阿 霉素。

近紅外二區(qū)熒光成像技術(shù)的優(yōu)勢使其具有巨 大的發(fā)展?jié)摿?，通過納米技術(shù)將這一成像優(yōu)勢與化 療功能結(jié)合有利于推動(dòng)腫瘤的診療發(fā)展。本研究 成功構(gòu)建了用于近紅外二區(qū)熒光成像的 IＲ1061 脂 質(zhì)體，對脂質(zhì)體進(jìn)行表征并通過體外成像實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證 其近紅外二區(qū)成像能力，并通過在脂質(zhì)體水核載入 DOX 作為治療劑，具備實(shí)現(xiàn)診斷與治療聯(lián)合的潛 力。另一方面，通過激光共聚焦實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證所制備陽 離子脂質(zhì)體引起細(xì)胞對 DOX 攝取增強(qiáng)，并進(jìn)一步 通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明，十八胺與 DOX 聯(lián)合起到增強(qiáng) 脂質(zhì)體抗腫瘤能力的作用。

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